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如何选择高效液相色谱仪的梯度洗脱与等度洗脱

时间:2015-04-20??编辑:www146net仪器字体:
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液相色谱仪的梯度洗脱和气相色谱仪中的程序升温类似,给色谱分离带来很大的方便,已成为高效液相色谱仪不可缺少的部分。
所谓梯度洗脱,就是有两种或两种以上不同极性的溶剂,在分离过程中按照一定程序连续地改变,以改变流动相的配比和极性。通常用的流动相为二元溶剂。在梯度运行期间,强溶剂B(如反相HPLC中的甲醇)的浓度增大。一般以这种溶剂中强溶剂B的体积比(%B)表示。



一、现在有许多实验室在使用液相色谱仪的梯度洗脱技术,这是因为梯度洗脱可克服等度洗脱中的一些弱点问题:
1、减少手工比例配比流动相,从而避免由此引起的误差;
2、 避免早流出峰分离度不好的缺点;
3、避免晚流出峰峰变快峰高降低的缺点;
4、 避免混合物容量因子范围宽时分析时间长的缺点;
5、 避免保留时间长的组分污染色谱柱的缺点。
二、梯度洗脱液相色谱仪适合于以下几种分析情况:
1、 具有较宽容量因子范围的样品,即组分较为复杂的;
2 、大分子样品,相对分子质量大于1000的,尤其是生物样品。
3 、一些含有高保留时间的组分会干扰样品分析,如果在一次分析中不能把它洗脱出去,就会残留污染色谱柱,并影响下一次的样品分析。
4、 即使在使用等度时也可以使用梯度洗脱选择流动相的比例。

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